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缺氧条件下人卵巢癌细胞对顺铂耐药与TLR9的关系研究
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| 篇名： | 缺氧条件下人卵巢癌细胞对顺铂耐药与TLR9的关系研究 |
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| 摘要： | 目的：研究缺氧条件下人卵巢癌细胞（SKOV3）对顺铂耐药与Toll样受体9（TLR9）的关系。方法：采用免疫荧光法检测破膜和未破膜SKOV3中TLR9的表达。取SKOV3，加入TLR9特异性激动剂CpG-ODN 2006（A组）及其同型对照CpG-ODN 2006 control（B组）作用6、12、24 h后，加入顺铂，以CCK-8法检测细胞抑制率。取SKOV3或经0（未加）、1、10、102、103 μmol/L TLR9特异性拮抗剂氯喹预处理3 h后的SKOV3，加入SKOV3常氧（21％O2）、缺氧（1％O2）孵育6、12、24 h的细胞上清作用24 h后，加入顺铂，检测细胞增殖抑制率，计算预处理细胞缺氧时药物抑制率的降低倍数（HICR）；并采用Western blot法检测常氧24 h细胞上清（C组）、缺氧24 h细胞上清（D组）、缺氧24 h细胞上清+10 μmol/L氯喹（E组）条件下SKOV3中多药耐药相关蛋白（MRP）的表达。结果：TLR9在SKOV3的细胞膜和细胞质中均有表达。与A组比较，B组细胞增殖抑制率降低（P＜0.01）。与常氧细胞上清比较，缺氧细胞上清作用后细胞增殖抑制率降低（P＜0.05）。与未加氯喹比较，加入10、102 μmol/L氯喹能明显降低HICR（P＜0.01），其中缺氧24 h细胞上清+10 μmol/L氯喹降低最明显。与C组比较，D组细胞中MRP表达增强（P＜0.01）；与D组比较，E组细胞中MRP表达减弱（P＜0.01）。结论：TLR9受体在缺氧下可被激活，并可导致SKOV3对顺铂耐药，该作用可能与上调MRP表达有关。 |
| ABSTRACT： | OBJECTIVE： To study the relationship between cisplatin-resistant of human ovarian cancer cells （SKOV3） and Toll-like receptor 9 （TLR9） under hypoxia. METHODS： Immunofluorescence method was used to detect the TLR9 expression in rupture and intact membranes SKOV3. SKOV3 was taken， adding cisplatin， then CCK-8 was used to detect cell inhibition rate after 6， 12， 24 h of added into TLR9 specific agonists CpG-ODN 2006 （group A） and its isotype control CpG-ODN 2006 control （group B）. SKOV3 or SKOV3 pretreated by 0 （not added）， 1， 10， 102， 103 μmol/L TLR9 specific antagonist chloroquine for 3 h were taken， adding cisplatin， cell inhibition rate was detected after 24 h of added into SKOV3 normoxia （21％ O2）， hypoxia （1％ O2） incubating 6，12，24 h， HICR under hypoxia in pretreatment was calculated. Western blot method was used to detect the multidrug resistance associated protein （MRP） expression in SKOV3 under the conditions of normoxia 24 h cell supernatant （group C）， hypoxia 24 h cell supernatant （group D）， hypoxia 24 h cell supernatant+10 μmol/L chloroquine （group E）. RESULTS： TLR9 was expressed in both cell membrane and cytoplasm of SKOV3. Compared with group A， cell inhibition rate in group B was decreased （P＜0.01）. Compared with normoxia cell supernatant， cell inhibition rate was decreased after hypoxia cell supernatant （P＜0.05）. Compared with not added chloroquine， adding 10， 102 μmol/L chloroquine can obviously decrease HICR （P＜0.01）， and the most significant decrease was showed when using hypoxia 24 h cell supernatant+10 μmol/L chloroquine. Compared with group C， MRP expression in group D was strengthened （P＜0.01）； compared with group D， MRP expression in group E was weakened （P＜0.01）. CONCLUSIONS： TLR9 receptors can be activated under hypoxia， and cause SKOV3 to cisplatin-resistance， the effect may be related with up-regulating MRP expression. |
| 期刊： | 2017年第28卷第13期 |
| 作者： | 李玲，李斌，幸海燕，陈剑鸿 |
| AUTHORS： | LI Ling，LI Bin，XING Haiyan，CHEN Jianhong |
| 关键字： | 人卵巢细胞；缺氧；化疗敏感性；Toll样受体9；顺铂 |
| KEYWORDS： | Human ovarian cells； Hypoxia； Chemotherapy sensitivity； Toll-like receptor-9； Cisplatin |
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