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化痰祛湿活血方抑制巨噬细胞焦亡改善代谢相关脂肪性肝炎的作用机制研究
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| 篇名： | 化痰祛湿活血方抑制巨噬细胞焦亡改善代谢相关脂肪性肝炎的作用机制研究 |
| TITLE： | Study on the mechanism of Huatan qushi huoxue formula in improving metabolic dysfunction-associated steatohepatitis by inhibiting macrophage pyroptosis |
| 摘要： | 目的 聚焦NOD样受体蛋白3/胱天蛋白酶1/消皮素D（NLRP3/Caspase-1/GSDMD）经典焦亡通路，探讨化痰祛湿活血方（HQHF）抑制巨噬细胞焦亡改善代谢相关脂肪性肝炎（MASH）的作用机制。方法将RAW264.7细胞分为Control组（10%空白血清）、Model组[10%空白血清+5μg/mL脂多糖（LPS）]、HQHF-L组（2.5%含药血清+7.5%空白血清+5μg/mLLPS）、HQHF-M组（5%含药血清+5%空白血清+5μg/mLLPS）、HQHF-H组（10%含药血清+5μg/mLLPS）。给药后常规培养24h，收集细胞及细胞培养上清液。采用扫描电子显微镜和相差荧光显微镜观察细胞形态；采用免疫荧光法观察消皮素D-N端（GSDMD-N）蛋白的定位与表达；采用酶联免疫吸附测定法检测细胞培养上清液中白细胞介素1β（IL-1β）、IL-18含量；采用实时荧光定量聚合酶链式反应法和Westernblot法检测细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD的mRNA及其蛋白表达。结果与Control组比较，Model组细胞呈现典型焦亡形态，GSDMD-N蛋白在细胞膜聚集且荧光强度显著增强（P＜0.05），细胞培养上清液中IL-1β、IL-18含量均显著升高（P＜0.05），细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMDmRNA及其蛋白表达均显著上调（P＜0.05）。与Model组比较，HQHF-L、HQHF-M、HQHF-H组细胞的焦亡形态改善，细胞中GSDMD-N蛋白的膜定位减少且荧光强度显著减弱（P＜0.05），细胞培养上清液中IL-1β、IL-18含量均显著降低（P＜0.05），细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMDmRNA及其蛋白表达均显著下调（P＜0.05）。结论化痰祛湿活血方能抑制LPS诱导的巨噬细胞焦亡，其改善MASH的作用机制可能与抑制NLRP3/Caspase-1/GSDMD经典焦亡通路的激活相关。 |
| ABSTRACT： | OBJECTIVE To focus on the classic NOD-like receptor protein 3 （NLRP3）/Caspase-1/gasdermin D （GSDMD） pyroptosis pathway and explore the mechanism by which Huatan qushi huoxue formula （HQHF） inhibits macrophage pyroptosis to ameliorate metabolic dysfunction-associated steatohepatitis （MASH）. METHODS RAW264.7 cells were divided into 5 groups： Control group （10% blank serum）， Model group [10% blank serum+5 μg/mL lipopolysaccharide （LPS）]， HQHF-L group （2.5% drug-containing serum+7.5% blank serum+5 μg/mL LPS）， HQHF-M group （5% drug-containing serum+5% blank serum+5 μg/mL LPS）， and HQHF-H group （10% drug-containing serum+5 μg/mL LPS）. After 24 h of routine culture post-administration， cells and supernatants were collected for assays. Cell morphology was observed via scanning electron microscopy and phase-contrast microscopy； localization and expression of gasdermin D-N （GSDMD-N） were observed by immunofluorescence. Interleukin-1β （IL-1β） and IL-18 contents in supernatants were detected by ELISA； mRNA and protein expressions of NLRP3， Caspase-1， and GSDMD were measured using real-time PCR and Western blot. RESULTS Compared with the Control group， the Model group showed typical pyroptotic morphology （cell membrane bulging and pore formation）， increased aggregation and fluorescence intensity of GSDMD-N on the cell membrane （ P ＜0.05）， significantly increased the contents of IL-1β and IL-18 in cell supernatants （ P ＜0.05）， and significantly up-regulated mRNA and protein expressions of NLRP3， Caspase-1， and GSDMD in cells （ P ＜0.05）. Compared with the Model group， the HQHF-L， HQHF-M and HQHF-H groups showed improved pyroptotic morphology， reduced membrane localization and significantly weakened fluorescence intensity of GSDMD-N （ P ＜0.05）， significantly decreased the contents of IL-1β and IL-18 in cell supernatants （ P ＜0.05）， and significantly down-regulated mRNA and protein expressions of NLRP3， Caspase-1， and GSDMD in cells （ P ＜0.05）. CONCLUSIONS HQHF inhibits LPS-induced macrophage pyroptosis， and its mechanism of improving MASH may be associated with the suppression of the activation of the classical NLRP3/Caspase-1/GSDMD pyroptosis pathway. |
| 期刊： | 2026年第37卷第07期 |
| 作者： | 管雅捷；张琪振；徐俊姣；宋艺佳；尚东方；赵文霞；刘鸣昊 |
| AUTHORS： | GUAN Yajie，ZHANG Qizhen，XU Junjiao，SONG Yijia，SHANG Dongfang，ZHAO Wenxia，LIU Minghao |
| 关键字： | 化痰祛湿活血方；代谢相关脂肪性肝炎；巨噬细胞；焦亡；NOD样受体蛋白3；胱天蛋白酶1；消皮素D |
| KEYWORDS： | Huatan qushi huoxue formula； metabolic dysfunction-associated steatohepatitis； macrophage； pyroptosis； NOD- |
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