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大鼠血浆中重组人钙调磷酸酶B亚基的ELISA双抗体夹心法测定及其药动学研究
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| 篇名： | 大鼠血浆中重组人钙调磷酸酶B亚基的ELISA双抗体夹心法测定及其药动学研究 |
| TITLE： | |
| 摘要： | 目的：建立大鼠血浆中重组人钙调磷酸酶B亚基（rhCNB）的测定方法，并研究其药动学特征。方法：采用酶联免疫吸附（ELISA）双抗体夹心法，将1 μg/ml的rhCNB单克隆抗体mAb包板，加入待测样品，再加入rhCNB多克隆抗体pAb（稀释比例为 1 ∶ 5 000）和辣根过氧化酶（HRP）标记抗免疫球蛋白G（IgG）（稀释比例为1 ∶ 10 000），以四甲基联苯胺显色，用酶标仪在450 nm波长处测定吸光度（OD值）。测定6只大鼠iv 2.5 mg/kg rhCNB后2、15、30、60、120、240、480、720 min的血药浓度，以BAPP 3.0软件计算药动学参数。结果：rhCNB检测质量浓度的线性范围为0.195～12.5 ng/ml（r2＝0.995 0），定量下限为0.195 ng/ml，准确度为97.300％～103.622％（RSD均小于7.5％，n＝6）；批内、批间和反复冻融3次的RSD均不大于8.5％（n＝6、18、15）。该药在大鼠体内的药动学特征符合二室模型，AUC0-720 min为173.038 mg·min/L、t1/2为94.62 min。结论：建立的方法特异性强、灵敏度高、准确度及精密度好，可用于生物样品中rhCNB的定量检测和药动学研究。 |
| ABSTRACT： | OBJECTIVE： To establish a method for determining recombinant human calmodulin B subunit （rhCNB） in rat plasma， and study its pharmacokinetics characteristics. METHODS： ELISA double-antibody sandwich method was adopted. 1 μg/ml rhCNB monoclonal antibody mAb was wrapped， added to the to-be-test sample， rhCNB polyclonal antibody pAb （dilution ratio of 1 ∶ 5 000） and HRP-labeled conjugate of anti-IgG （dilution ratio of 1 ∶ 10 000） were added. Using tetramethylbenzidine for developing， microplate reader was conducted in wavelength of 450 nm to determine the absorbance value （OD value） and plasma concentration of 6 rats after 2， 15， 30， 60， 120， 240， 480， 720 min of iv 2.5 mg/kg rhCNB， and the pharmacokinetic parameters were calculated by BAPP 3.0 software. RESULTS： The linear range of rhCNB were 0.195-12.5 ng/ml （r2＝0.995 0）， lower limit of quantitation was 0.195 ng/ml， accuracy were 97.300％-103.622％ （RSD＜7.5％， n＝6）； RSDs of within-batch， inter-batch， freezing and thawing 3 times were no higher than 8.5％ （n＝6， 18， 15）. rhCNB pharmacokinetics characteristics in rat fitted to two-compartment model， AUC0-720 min was 173.038 mg·min/L and t1/2 was 94.62 min. CONCLUSIONS： The established method has high specificity and sensitivity， good accuracy and precision， which can be used for rhCNB quantitative detection and pharmacokinetics study in biological samples. |
| 期刊： | 2016年第27卷第25期 |
| 作者： | 韩克胜，谢学立，田树红，邢桂兰，符江，邢俊，林春华，谭鹏，邵继平 |
| AUTHORS： | HAN Kesheng，XIE Xueli，TIAN Shuhong，XING Guilan，FU Jiang，XING Jun，LIN Chunhua，TAN Peng，SHAO Jiping |
| 关键字： | rhCNB多肽；酶联免疫吸附双抗体夹心法；大鼠；定量检测；药动学 |
| KEYWORDS： | rhCNB polypeptide； ELISA-antibody sandwich method； Rat； Quantitative detection； Pharmacokinetics |
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