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小檗碱通过下调METTL3表达抑制肾癌细胞侵袭和迁移的机制
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| 篇名： | 小檗碱通过下调METTL3表达抑制肾癌细胞侵袭和迁移的机制 |
| TITLE： | Mechanism of berberine inhibiting invasion and migration of renal carcinoma cells by down-regulating the expression of METTL3 |
| 摘要： | 目的 探讨小檗碱（BER）对人肾癌细胞侵袭、迁移的抑制作用及可能机制。方法以人肾癌OSRC-2细胞为对象进行实验。采用alamarBlue法测定0（对照组）、25、50、75、100、125、150、175、200μmol/LBER作用24、48h后对OSRC-2细胞增殖的抑制作用。用0（对照组）、50、100μmol/LBER作用于细胞48h后，通过流式细胞术分析BER对细胞周期的影响；通过细胞划痕实验观察24、36h时各组细胞的迁移能力；通过Transwell实验观察作用24h时各组细胞的侵袭能力；并通过Westernblot法检测上述药物作用48h后细胞中甲基转移酶样蛋白3（METTL3）的蛋白表达，通过RNA甲基化定量试剂盒检测各组细胞内RNA的N6-甲基腺嘌呤（m6A）水平。结果与对照组比较，不同浓度BER均可显著升高OSRC-2细胞的增殖抑制率（P＜0.01），并呈时间和浓度依赖性趋势；50、100μmol/LBER作用48h后可将细胞周期阻滞在G0/G1期（P＜0.01）；50、100μmol/LBER组细胞的迁移、侵袭能力均显著降低（P＜0.05或P＜0.01），细胞中METTL3蛋白的表达水平和RNA的m6A水平均显著降低（P＜0.01）。结论BER可通过下调METTL3的表达，进而抑制m6A水平，从而抑制人肾癌细胞的侵袭、迁移。 |
| ABSTRACT： | OBJECTIVE To investigate the inhibitory effect of berberine （BER） on the invasion and migration of human renal carcinoma cells and its potential mechanism. METHODS Using human renal carcinoma OSRC-2 cell as object， alamarBlue assay was adopted to detect the inhibitory effects of 0 （control group）， 25， 50， 75， 100， 125， 150， 175 and 200 μmol/L BER on the proliferation of OSRC-2 cell after treatment for 24 h and 48 h. After treated with 0（control group）， 50， 100 μmol/L BER for 48 h， the effect of BER on cell cycle was analyzed by flow cytometry. The migration of OSRC-2 cells in 24 h and 36 h was observed by cell scratch test， and the invasion ability of OSRC-2 cells in 24 h was detected by Transwell assay. The protein expression of methyltransferase-like 3 （METTL3） was detected by Western blot after treatment for 48 h， and RNA methylation quantification kit was used to detect the levels of N6-methyladenosine （m6A） in OSRC-2 cells. RESULTS Compared with control group， BER at different concentrations could significantly decrease the survival rate of OSRC-2 cells （P＜0.01）， and showed a dose-dependent and time-dependent manner. After 48 h of BER treatment at 50， 100 μmol/L， the cell was arrested in G0/G1 phase （P＜0.01）. Compared with control group， the migration and invasion abilities of cells in 50， 100 μmol/L BER group were significantly decreased （P＜0.05 or P＜0.01）； the protein expression of METTL3 and the level of m6A in RNA were significantly decreased （P＜0.01）. CONCLUSIONS BER can inhibit level of m6A by down-regulating the expression of METTL3， thereby inhibiting the invasion and metastasis of human renal carcinoma cells. |
| 期刊： | 2023年第34卷第15期 |
| 作者： | 杨天宇；帅立雄；许竞泽；程馨阳；许志明；张永胜 |
| AUTHORS： | YANG Tianyu，SHUAI Lixiong，XU Jingze，CHENG Xinyang，XU Zhiming，ZHANG Yongsheng |
| 关键字： | 小檗碱；人肾癌OSRC-2细胞；迁移；侵袭；甲基转移酶样蛋白3；N6-甲基腺嘌呤 |
| KEYWORDS： | berberine； human renal carcinoma OSRC-2 cell； migration； invasion； methyltransferase-like 3； N6- |
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