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脑心通胶囊药效成分对HUVEC增殖及其JAK/STAT信号通路、血管活性物质、黏附分子、炎症因子的影响
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篇名： 脑心通胶囊药效成分对HUVEC增殖及其JAK/STAT信号通路、血管活性物质、黏附分子、炎症因子的影响
TITLE： Effects of Active Components of Naoxintong Capsule on the Proliferation of HUVEC and Its JAK/STAT Signal Pathway，Vasoactive Substances ，Adhesion Molecules and Inflammatory Factors
摘要： 目的：研究脑心通胶囊主要药效成分对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖及其JAK/STAT信号通路、血管活性物质、黏附分子、炎症因子的影响，以期阐明脑心通胶囊活血化瘀的作用机制。方法：采用CCK-8法检测不同浓度的12个脑心通胶囊药效成分[咖啡酸（1.56～200μmol/L）、阿魏酸（1.56～200μg/mL）、洋川芎内酯H（3.125～200μmol/L）、丁烯基苯酞（3.125～200μmol/L）、藁本内酯（1.56～200μmol/L）、隐丹参酮（0.625～80μmol/L）、丹参素钠（1.56～200μmol/L）、芍药苷（1.56～200μmol/L）、芒柄花素（1.56～200μmol/L）、丹酚酸B（1.56～200μmol/L）、儿茶素（1.56～200μmol/L）、黄芪甲苷（1.56～200μmol/L）]作用24h后对HUVEC增殖的影响；采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测上述各药效成分（均分别设置3个剂量组，并设0μmol/L的空白对照组，下同）对HUVEC的JAK/STAT信号通路关键蛋白Janus激酶（JAK2）、信号转导子及转录激活子（STAT3）、蛋白激酶B（Akt）、细胞外调节蛋白激酶（ERK）mRNA表达的影响；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各药效成分对HUVEC的纤溶酶原激活物抑制因子1（PAI-1）、血管内皮细胞黏附分子1（VCAM-1）、细胞间黏附分子1（ICAM-1）、血管内皮生长因子（VEGF）、核因子κBp65（NF-κBp65）表达的影响。结果：阿魏酸（6.25、25～200μg/mL）、洋川芎内酯H（6.25～200μmol/L）、藁本内酯（200μmol/L）、隐丹参酮（10～80μmol/L）、芍药苷（1.56、6.25、12.5μmol/L）、丹酚酸B（1.56～12.5、200μmol/L）和儿茶素（25μmol/L）可显著抑制HU-VEC增殖，咖啡酸（1.56、12.5μmol/L）、藁本内酯（50μmol/L）、丹参素钠（6.25μmol/L）、芒柄花素（1.56、100、200μmol/L）可显著促进HUVEC细胞增殖（P＜0.05或P＜0.01）。与空白对照组比较，阿魏酸、芒柄花素、丹酚酸B和黄芪甲苷部分剂量组细胞中JAK2、STAT3和Akt的mRNA相对表达量均显著降低（P＜0.05或P＜0.01）；咖啡酸、阿魏酸和丁烯基苯酞部分剂量组细胞中PAI-1表达水平显著降低，咖啡酸、阿魏酸、丁烯基苯酞、隐丹参酮、芒柄花素和儿茶素部分剂量组细胞中ICAM-1和VCAM-1表达水平显著降低，阿魏酸、丁烯基苯酞、芒柄花素、丹酚酸B和黄芪甲苷部分剂量组细胞中NF-κBp65表达水平显著降低，咖啡酸和儿茶素部分剂量组细胞中VEGF表达水平显著升高（P＜0.05或P＜0.01）。结论：脑心通胶囊中药效成分可能通过抑制HUVEC中JAK/STAT信号通路关键蛋白mRNA和PAI-1、ICAM-1、VCAM-1、NF-κBp65的表达，并促进VEGF表达，从而发挥其活血化瘀的功效。
ABSTRACT： OBJECTIVE：To study the effects of the main active components of Naoxintong capsule （NXTC）on the proliferation of human umbilical vein endothelial cell（HUVEC） and its key protein JAK/STAT signal pathway ， vasoactive substances ，adhesion molecules and inflammatory factors so as to clarify the m echanism of NXTC for promoting blood circulation and removing blood stasis. METHODS ：The effects of different concentration of 12 active components [caffeic acid（1.56-200 μmol/L），ferulic acid （1.56-200 μmol/L），senkyunolide H （3.125-200 μmol/L），n-butylidenephthalide（3.125-200 μmol/L），ligustilide（1.56-200 μmol/L），cryptotanshinone（0.625-80 μmol/L），tanshinol sodium （1.56-200 μmol/L），paeoniflorin （1.56-200 μmol/L），formononetin（1.56-200 μmol/L），salvianolic acid B （1.56-200 μmol/L），catechin（1.56-200 μmol/L）and astragaloside Ⅳ（1.56-200 μmol/L）] on the proliferation of HUVECs were evaluated by CCK- 8 assay. The effects of above active components（3 dose groups ，setting up 0 μmol/L blank control group，hereinafter）on mRNA expression of key proteins JAK 2， STAT3，Akt，ERK in JAK/STAT signal pathway were measured by RT-PCR. The effects of each active component on the expression of PAI- 1，VCAM-1，ICAM-1，VEGF and NF-κB p65 were detected by ELISA. RESULTS ：Ferulic acid （6.25，25-200 μg/mL），senkyunolide H （6.25-200 μmol/L），ligustilide（200 μmol/L），cryptotanshinone（10-80 μmol/L），paeoniflorin（1.56， 6.25，12.5 μmol/L），salvianolic acid B （1.56-12.5 μmol/L，200 μmol/L）and catechin （25 μmol/L）could significantly inhibit the proliferation of HUVECs ；caffeic acid （1.56，12.5 μmol/L），ligustilide（50 μmol/L），trashinol sodium （6.25 μmol/L）and paeoniflorin（1.56，100，200 μmol/L）could significantly promote the proliferation of HUVECs （P＜0.05 or P＜0.01）. Compared with blank control group ，mRNA expression of JAK 2，STAT3 and Akt were decreased significantly in some dose groups of ferulic acid，formononetin，salvianolic acid B and astragaloside Ⅳ（P＜0.05 or P＜0.01）；the expression of PAI- 1 were significantly decreased in some dose groups of caffeic acid ，ferulic acid and n-butylphthalide；the expression of ICAM- 1 and VCAM- 1 were decreased significantly in some dose groups of caffeic acid ，ferulic acid ，n-butenylphthalide，cryptotanshinone，formononetin and catechin；the expression of NF-κB p65 were decreased significantly in some dose groups of ferulic acid ，n-butenylphthalide， formononetin，salvianolic acid B and astragaloside Ⅳ；the expression of VEGF were increased significantly in some dose groups of caffeic acid and catechin （P＜0.05 or P＜0.01）. CONCLUSIONS ：The active components of Naoxintong capsule may play the role of promoting blood circulation and removing blood stasis by inhibiting the expression of JAK/STAT signal pathway key protein mRNA and PAI- 1，ICAM-1，VCAM-1，NF-κB p65 in HUVEC ，and promoting the expression of VEGF.
期刊： 2021年第32卷第03期
作者： 李伟霞，王晓艳，贾文汇，张明亮，唐进法，李学林
AUTHORS： LI Weixia ，WANG Xiaoyan ，JIA Wenhui ，ZHANG Mingliang ，TANG Jinfa，LI Xuelin
关键字： 脑心通胶囊；人脐静脉内皮细胞；血管活性物质；黏附分子；炎症因子；药效成分；JAK/STAT信号通路；作用机制
KEYWORDS： Naoxintong capsule ； Human umbilical vein endothelial cells ；Vasoactive substances ；Adhesion molecule ；
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