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UPLC-MS/MS法测定不同温度定向炮制黄芪中8种苷类和4种苷元成分的含量
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| 篇名： | UPLC-MS/MS法测定不同温度定向炮制黄芪中8种苷类和4种苷元成分的含量 |
| TITLE： | Determination of 8 Glycosides and 4 Aglycones in Directionally Processed Astragalus membranaceus under Different Temperatures by UPLC-MS |
| 摘要： | 目的：建立测定黄芪中8种苷类（黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、黄芪异黄烷苷、黄芪紫檀烷苷）及4种苷元（毛蕊异黄酮、芒柄花素、黄芪异黄烷、黄芪紫檀素）成分含量的方法，并考察不同炮制温度对上述12种成分含量的影响。方法：分别以生黄芪和不同温度（120、140、160、180、200℃）烘制后的黄芪为样品，采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）法测定其中12种成分的含量。色谱柱为ACQUITYUPLCHSST3，流动相为0.1％甲酸水溶液-0.1％甲酸乙腈溶液（梯度洗脱），流速为0.5mL/min，柱温为30℃，检测波长为260nm，进样量为2μL。采用电喷雾离子源，在正离子模式下进行监测扫描，扫描范围为质菏比50～1500，毛细管电压为2000V，离子源温度为100℃，脱溶剂温度为400℃，雾化气（N2）流速为40L/h，脱溶剂气（N2）流速为800L/h，碰撞能量为20～30V，数据采集速率为0.5s/scan。结果：黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪皂苷Ⅳ、毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷、芒柄花素、黄芪异黄烷苷、黄芪异黄烷、黄芪紫檀烷苷、黄芪紫檀素的检测质量线性范围分别为0.00116～0.2320、0.000276～0.0552、0.00022～0.0440、0.000225～0.0450、0.000734～0.5870、0.00117～0.2340、0.000742～0.1480、0.00130～0.260、0.00398～0.7950、0.000476～0.4760、0.00189～0.3780、0.000336～0.3360μg（R2均不低于0.9992）；检测限分别为6.2×10－6、4.8×10－6、3.8×10－6、3.4×10－6、5.8×10－6、4.8×10－6、4.2×10－6、3.2×10－6、5.8×10－6、2.6×10－6、4.2×10－6、6.4×10－6μg；定量限分别为12.6×10－6、16.2×10－6、14.4×10－6、14.8×10－6、18.8×10－6、16.4×10－6、15.4×10－6、10.8×10－6、20.2×10－6、12.4×10－6、14.6×10－6、23.4×10－6μg；精密度、稳定性（24h）、重复性试验的RSD均小于3.0％（n＝6）；平均加样回收率分别为99.1％、100.2％、98.7％、101.9％、98.6％、102.1％、99.2％、100.3％、98.7％、99.2％、99.3％、100.8％，RSD分别为1.9％、2.2％、2.4％、1.8％、2.1％、1.7％、2.3％、1.9％、2.4％、1.8％、2.2％、1.9％（n＝6）。含量测定结果显示，黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的含量随着烘制温度的升高而逐渐降低，黄芪皂苷Ⅳ的含量随着温度的升高而逐渐升高；黄酮苷类成分毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、黄芪异黄烷苷、黄芪紫檀烷苷的含量均随着烘制温度的升高而降低，而对应的苷元成分毛蕊异黄酮、芒柄花素、黄芪紫檀素的含量均随着烘制温度的升高而先升高后降低；黄芪异黄烷的含量随着烘制温度的升高而降低。结论：所建立的UPLC-MS/MS法可用于黄芪中12种成分含量的测定；黄芪经不同温度炮制后，苷类成分含量总体呈降低趋势，苷元成分含量总体呈升高趋势。 |
| ABSTRACT： | OBJECTIVE：To establish a method for the determination of 8 glycosides（astragaloside Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ and calycosin glucopyranoside ，2′-hydroxy-3′，4′-dimethoxy-isoflavan-glucoside and 9，10-dimethoxy-pterocarpan-glucoside） and 4 aglycones（calycosin，formononetin，7，2′-dihydroxy-3′，4′-dimethoxy-isoflavan and 3-hydroxy-9，10-dimethoxy-pterocarpan） in Astragalus membranaceus ，and to investigate the effects of different processing temperatures on the contents of above 12 components. METHODS ：The contents of 12 components in A. membranaceus and samples processed under different temperatures（120，140，160，180，200 ℃）were determined by UPLC-MS/MS. The determination was performed on ACQUITY UPLC HSS T 3 column with mobile phase consisted of 0.1 mol/L formic acid water solution -0.1 mol/L formic acid acetonitrile solution （gradient elution ）at the flow rate of 0.5 mL/min. The column temperature was 30 ℃. The detection wavel ength was 260 nm，and sample size was 2 μL. Electrospray ion source（ESI）was used under positive ion mode （ESI+）. The mass scanning range was mass ratio （m/z）of 50-1 500，with capillary voltage of 2 000 V and ion source temperature of 100 ℃. The desolvation temperature was 400 ℃；flow rate of atomizing gas （N2） was 40 L/h，and that of desolvation was 800 L/h；collision energy （CE）was 20-30 V；data acquisition rate was 0.5 s/scan. RESULTS：The linear range of astragaloside Ⅰ，astragaloside Ⅱ，astragaloside Ⅲ，astragaloside Ⅳ，calycosin-glucopyranoside， calycosin，ononin，formononetin，2′-hydroxy-3′，4′-dimethoxy-isoflavan-glucoside，7，2′-dihydroxy-3′，4′-dimethoxy-isoflavan，9， 10-dimethoxy-pterocarpan-glucoside and 3-hydroxy-9，10-dimethoxy-pterocarpan were 0.001 16-0.232 0，0.000 276-0.055 2， 0.000 22-0.044 0，0.000 225-0.045 0，0.000 734-0.587 0，0.001 17-0.234 0，0.000 742- 0.148 0，0.001 30-0.260，0.003 98-0.795 0， 0.000 476-0.476 0，0.001 89-0.378 0，0.000 336-0.336 0 μg（all R2≥0.999 2），respectively. The limits of detection were 6.2×10－6， 4.8×10－6，3.8×10－6，3.4×10－6，5.8×10－6，4.8×10－6，4.2×10－6，3.2×10－6，5.8×10－6，2.6×10－6，4.2×10－6，6.4×10－6 μg，respectively. The limits of quantitation were 12.6×10－6，16.2×10－6，14.4×10－6，14.8×10－6，18.8×10－6，16.4×10－6，15.4×10－6，10.8×10－6，20.2×10－6， 12.4×10－6，14.6×10－6，23.4×10－6 μg，respectively. RSDs of precision ，stability（24 h）and repetition tests were all lower than 3.0％（n＝6）. The average recoveries were 99.1％，100.2％，98.7％，101.9％，98.6％，102.1％，99.2％，100.3％，98.7％， 99.2％，99.3％ and 100.8％，with the RSDs of 1.9％，2.2％，2.4％，1.8％，2.1％，1.7％，2.3％，1.9％，2.4％，1.8％，2.2％ and 1.9％（n＝6），respectively. The results showed that the contents of astragaloside Ⅰ，Ⅱ and Ⅲ decreased gradually with the increase of processing temperature ；the content of astragaloside Ⅳ increased gradually with the increase of temperature. The content of flavonoid glycosides ，such as calycosin glucopyranoside ，ononin，2′-hydroxy-3′，4′-dimethoxy-isoflavan-glucoside and 9， 10-dimethoxy-pterocarpan-glucoside decreased with the increase of temperature ；the corresponding aglycone components as flavonoid glycosides ，formononetin，3-hydroxy-9，10-dimethoxy- pterocarpan increased firstly and then decreased with the increase ； the content of 7，2′-dihydroxy-3′，4′- dimethoxy-isoflavan decreased with the increase of temperature. CONCLUSIONS ：Established UPLC-MS/MS method can be used for determination of 12 components in A. membranaceus . After processed under different temperature，the contents of glycosides decreased in general ，while the contents of aglycones increased in general. |
| 期刊： | 2020年第31卷第03期 |
| 作者： | 刘蓬蓬，张凡，史辑，单国顺，贾天柱 |
| AUTHORS： | LIU Pengpeng ，ZHANG Fan，SHI Ji，SHAN Guoshun ，JIA Tianzhu |
| 关键字： | 黄芪；超高效液相色谱-串联质谱法；苷类；苷元；含量测定；定向炮制 |
| KEYWORDS： | Astragalus membranaceus ；UPLC-MS/MS；Glycosides；Aglycones；Content det ermination；Directional processing |
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