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鸦胆子素D联合紫杉醇对胰腺癌Capan-2细胞增殖的抑制作用及机制研究
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| 篇名： | 鸦胆子素D联合紫杉醇对胰腺癌Capan-2细胞增殖的抑制作用及机制研究 |
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| 摘要： | 目的：探讨鸦胆子素D（BD）联合紫杉醇（Taxol）对人胰腺癌Capan-2细胞增殖的抑制作用及可能机制。方法：以Capan-2细胞为对象，采用磺酰罗丹明B法检测不同剂量BD（5、10、15、20 μmol/L）、Taxol（10、20、30、40 nmol/L）、BD+Taxol（5 μmol/L+10 nmol/L、10 μmol/L+20 nmol/L、15 μmol/L+30 nmol/L、20 μmol/L+40 nmol/L）作用48 h后的细胞增殖情况，并计算细胞存活率和药物合用指数（CI）。采用克隆形成试验检测BD（20 μmol/L，下同）、Taxol（40 nmol/L，下同）、BD+Taxol（20 μmol/L+40 nmol/L，下同）作用24 h后的细胞克隆集落形成情况，并计算克隆形成率；采用DAPI染色法观察BD、Taxol、BD+Taxol作用24 h后的细胞凋亡情况，采用Western blotting法检测的BD、Taxol、BD+Taxol作用后凋亡相关蛋白[Bcl-2、多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶（PARP）、胱天蛋白酶3（Caspase-3）、切割胱天蛋白酶3（Cleaved-caspase-3）；药物作用48 h]以及c-Jun氨基末端激酶（JNK）、磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）蛋白（药物作用4、6、12 h）的表达情况。结果：经10、15、20 μmol/L BD，20、30、40 nmol/L Taxol以及两药上述剂量联合作用48 h后，细胞的存活率均显著降低，且联用组显著低于BD、Taxol同剂量单药组（P＜0.05），各联用组（BD 5 μmol/L+Taxol 10 nmol/L、BD 10 μmol/L+Taxol 20 nmol/L、BD 15 μmol/L+Taxol 30 nmol/L、BD 20 μmol/L+Taxol 40 nmol/L）的CI值分别为0.63±0.04、0.68±0.08、0.89±0.12、0.84±0.05。经20 μmol/L BD、40 nmol/L Taxol以及两药上述剂量联合作用后，细胞的克隆集落形成有所减少，并伴有不同程度的染色质浓聚和细胞核皱缩，细胞的克隆形成率（24 h）以及Bcl-2（48 h）、RAPR（48 h）、Caspase-3（48 h）、JNK（4、6 h，Taxol单药组除外）的相对表达量均显著降低，Cleaved-caspase-3（48 h）、p-JNK（4、6、12 h）的相对表达量均显著升高，且BD+Taxol联用组均显著优于同时间点BD、Taxol同剂量单药组[JNK（4、6、12 h）、p-JNK（4 h）除外]（P＜0.05或P＜0.01）。结论：BD、Taxol均可抑制人胰腺癌Capan-2细胞的增殖并促进其凋亡，且两者联合具有一定的协同作用，效果优于任一药物单用。上述作用可能与激活Caspase通路以及JNK磷酸化等途径有关。 |
| ABSTRACT： | OBJECTIVE： To investigate the inhibitory effect and potential mechanism of Brucein D （BD） combined with Taxol on the proliferation of human pancreatic cancer Capan-2 cells. METHODS： Using Capan-2 cells as object， the proliferations after treated with BD （5， 10， 15， 20 μmol/L）， Taxol （10， 20， 30， 40 nmol/L） and BD+Taxol （5 μmol/L+10 nmol/L， 10 μmol/L+20 nmol/L， 15 μmol/L+30 nmol/L， 20 μmol/L+40 nmol/L） for 48 h were determined by sulfonyl rhodamine B method. Survival rate of cells and combination index （CI） were calculated. The clone formation assay was performed to detect the formation of clonal colonies after treated with BD （20 μmol/L，hereinafter）， Taxol （40 nmol/L，hereinafter）、BD+Taxol （20 μmol/L+40 nmol/L，hereinafter） for 24 h. The rate of clone formation was calculated. DAPI method was used to observe the apoptosis of cells after treated with BD， Taxol and BD+Taxol for 24 h. Western blotting was used to detect the expression of apoptosis-related protein （Bcl-2， PARP， Caspase-3， Cleaved-caspase-3） after treated by BD， Taxol， BD+Taxol for 48 h and the expression of JNK and p-JNK after treated by BD， Taxol， BD+Taxol for 4， 6， 12 h. RESULTS： After treated with 10， 15 and 20 μmol/L BD， 20， 30 and 40 nmol/L Taxol or two-drug combination for 48 h， survival rates of cells were decreased significantly； the survival rate of drug combination group was significantly lower than the same dose of BD group and Taxol group （P＜0.05）. CI values of drug combination groups （BD 5 μmol/L+Taxol 10 nmol/L， BD 10 μmol/L+Taxol 20 nmol/L， BD 15 μmol/L+Taxol 30 nmol/L， BD 20 μmol/L+Taxol 40 nmol/L） were 0.63±0.04， 0.68±0.08， 0.89±0.12 and 0.84±0.05. After treated with 20 μmol/L BD， 40 nmol/L Taxol and two-drug combination， the formation of clonal colonies was decreased with different degrees of chromatin concentration and nuclear shrinkage； the rate of clone formation （24 h）， the expression of Bcl-2 （48 h）， PARP （48 h）， Caspase-3 （48 h） and JNK （4， 6 h， except for Taxol group） were decreased significantly， while the relative expression of Cleaved-caspase-3 （48 h） and p-JNK （4， 6， 12 h） were increased significantly. Those of BD+Taxol group were significantly better than those of BD group and Taxol group [except for JNK （4， 6， 12 h）， p-JNK （4 h）] （P＜0.05 or P＜0.01）. CONCLUSIONS： Both BD and Taxol can inhibit the proliferation and promote apoptosis of human pancreatic cancer Capan-2 cells， and the combination have a certain synergistic effect， which is better than any single drug. It may be associated with activating Caspase pathway and JNK phosphorylation. |
| 期刊： | 2019年第30卷第6期 |
| 作者： | 黄玉玉，饶明君，谭笔琴，王慧铭，林能明 |
| AUTHORS： | HUANG Yuyu，RAO Mingjun，TAN Biqin，WANG Huiming，LIN Nengming |
| 关键字： | 鸦胆子素D；紫杉醇；人胰腺癌；Capan-2细胞；增殖；凋亡；胱天蛋白酶；c-Jun氨基末端激酶 |
| KEYWORDS： | Brucerin D； Taxol； Human pancreatic cancer； Capan-2 cells； Proliferation； Apoptosis； Caspase； JNK |
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