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高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨率质谱法快速检测大鼠血浆中6种附子生物碱
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| 篇名： | 高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨率质谱法快速检测大鼠血浆中6种附子生物碱 |
| TITLE： | |
| 摘要： | 目的：建立高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨率质谱法快速测定大鼠血浆中的乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱的方法。方法：血浆样品加入内标氢溴酸高乌甲素，以甲醇沉淀蛋白进行预处理。采用高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨率质谱法进行样品测定，色谱柱为Sinochrom ODS-BP C18，流动相为乙腈-1％甲酸水溶液（50 ∶ 50，V/V），流速为0.6 mL/min，进样量为10 μL，柱温为25 ℃，自动进样器温度为4 ℃；质谱扫描模式为全离子监测模式，正离子采集，设定检测离子质荷比（m/z）分别为646.32（乌头碱）、632.30（新乌头碱）、616.31（次乌头碱）、604.31（苯甲酰乌头原碱）、590.29（苯甲酰新乌头原碱）、574.30（苯甲酰次乌头原碱）、585.31（内标）。取雄性Wistar大鼠6只，单剂量灌胃附子总生物碱提取物（4 mg/kg），分别于给药前（0 h）和给药后0.5、0.75、1.25、1.5、2、4、6、8、10、24 h时取血，测定血浆药物浓度并以PK-Solver V2.0软件计算药动学参数。结果：血浆中6种附子生物碱质量浓度均在0.1～10 μg/L范围内线性关系良好（r＞0.992），定量限均为0.1 μg/L；平均提取回收率均大于75％，日内精密度、日间精密度、基质效应、稳定性试验的RSD均小于15％。大鼠血浆中6种附子生物碱的tmax均分别为1.2 h左右，t1/2均分别为10 h左右，单酯型乌头原碱的cmax均分别高于双酯型乌头碱。结论：本研究所建立的高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨率质谱法准确、灵敏、简便、快速，可用于6种附子生物碱的血药浓度监测。 |
| ABSTRACT： | OBJECTIVE： To establish HPLC-quadrupole/electrostatic field orbitrap high resolution mass spectrometry for rapid determination of aconitine， mesaconitine， hypaconitine， benzoylaconitine， benzoylmesaconine and benzoylhypacoitine in rat plasma. METHODS： Internal standard lappaconitine was added into plasma sample， and methanol precipitated protein was used for pretreatment. HPLC-quadrupole/electrostatic field orbitrap high resolution mass spectrometry was adopted. HPLC condition was as follows as Sinochrom ODS-BP C18 column， mobile phase consisted of acetonitrile-1％ formic acid solution （50 ∶ 50，V/V）， the flow rate of 0.6 mL/min， sample size of 10 μL， column temperature of 25 ℃， automatic sampler temperature of 4 ℃. Mass spectrum scanning mode was full ion monitoring model， positive ion acquisition， mass charge ratios （m/z） of ion were 646.32（aconitine）， 632.30（mesaconitine），616.31（hypaconitine），604.31（benzoylaconitine），590.29 （benzoylmesaconine），574.30（benzoylhypacoitine）， 585.31 （internal standard）. Six male Wistar rats were collected and given single dose of total alkaloid extract of Aconitum carmichaeli （4 mg/kg）intragastrically. Blood samples were collected before medication （0 h） and 0.5， 0.75， 1.25， 1.5， 2， 4， 6， 8， 10， 24 h after medication. Plasma concentration was determined and pharmacokinetic parameters were calculated by using PK-Solver V2.0 software. RESULTS：The linear range of 6 kinds of aconitum alkaloids in plasma were 0.1-10 μg/L （r＞0.992）. The limit of quantitation was 0.1 μg/L. Average recovery was higher than 75％， RSDs of intra-day and inter-day， matrix effects， stability test were all lower than 15％. The tmax of 6 kinds of aconite alkaloids were about 1.2 h； t1/2 were about 10 h； cmax of monoestertype aconite alkaloids were higher than those of diester-type aconite alkaloids. CONCLUSIONS： Established HPLC-quadrupole/electrostatic field orbitrap high resolution mass spectrometry is accurate， sensitive， simple and rapid， and can be used for plasma concentration monitoring of 6 kinds of aconitum alkaloids. |
| 期刊： | 2018年第29卷第6期 |
| 作者： | 赛那，金蓉，布仁，顾艳丽，林英华，雷雯朴，孙耀 |
| AUTHORS： | SAI Na，JIN Rong，BU Ren，GU Yanli，LIN Yinghua，LEI Wenpu，SUN Yao |
| 关键字： | 高效液相色谱法；四极杆/静电场轨道阱高分辨率质谱法；附子生物碱；血药浓度；大鼠 |
| KEYWORDS： | HPLC； Quadrurpole/electrostatic field orbitrap mass spectrometry； Aconitum alkaloids； Plasma concentration； Rats |
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