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人单核细胞THP-1源性泡沫细胞内雷帕霉素含量测定的HPLC法的建立及应用
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| 篇名： | 人单核细胞THP-1源性泡沫细胞内雷帕霉素含量测定的HPLC法的建立及应用 |
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| 摘要： | 目的：建立人单核细胞THP-1源性泡沫细胞内雷帕霉素（RAPA）含量的测定方法，研究RAPA靶向制剂（RAPA-NP-Apt）对泡沫细胞的靶向作用。方法：以氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1细胞建立泡沫细胞模型，取200 ng/mL的RAPA和200、400、800 ng/mL的RAPA-NP-Apt与泡沫细胞共同孵育60 min。采用高效液相色谱法（HPLC）测定细胞内RAPA含量，色谱柱为Diamonsil C18，流动相为乙腈-水（90 ∶ 10，V/V），流速为1.0 mL/min，柱温为40 ℃，检测波长为278 nm，进样量为20 μL。结果：RAPA检测质量浓度线性范围为50～6 400 ng/mL（r＝0.999 96），平均回收率为98.72％（RSD＝0.62％，n＝3），日内、日间RSD均不大于6.15％（n＝6），稳定性试验的RSD＜2％（n＝6），重复性试验的RSD＝1.64％（n＝6）。RAPA和低、中、高质量浓度的RAPA-NP-Apt与泡沫细胞共孵育后RAPA的含量分别为12、43、98、140 ng/106个细胞。结论：本方法操作简单，稳定性和重复性好，可用于泡沫细胞内RAPA的含量测定。RAPA-NP-Apt可提高RAPA对泡沫细胞的靶向作用。 |
| ABSTRACT： | OBJECTIVE： To establish the method for the content determination of rapamycin （RAPA） in human monocyte THP-1 derived foam cells， and to study the effects of RAPA targeting preparation （RAPA-NP-Apt） targeting at foam cells. METHODS： Foam cells model were established through THP-1 cells were induced by oxidized low density lipoprotein. Foam cells were incubated with 200 ng/mL RAPA or 200， 400， 800 ng/mL RAPA-NP-Apt for 60 min. The content of RAPA was determined by HPLC. The determination was performed on Diamonsil C18 column with mobile phase consisted of acetonitrile-water （90 ∶ 10， V/V） at flow rate of 1.0 mL/min. The column temperature was set at 40 ℃， and the detection wavelength was 278 nm. The sample size was 20 μL. RESULTS： The concentration of RAPA ranged 50-6 400 ng/mL （r＝0.999 96） with average recovery of 98.72％ （RSD＝0.62％， n＝3）. RSDs of inter-day and intra-day were not more than 6.15％ （n＝6）， RSD of stability was lower than 2％ （n＝6）， and RSD of repeatability was 1.64％ （n＝6）. After foam cells were incubated with RAPA or low-concentration， medium-concentration and high-concentration of RAPA-NP-Apt， the contents of RAPA were 12， 43， 98， 140 ng/106 cells. CONCLUSIONS： The method is simple， stable and reproducible. It can be used for content determination of RAPA in foam cells. RAPA-NP-Apt can improve the effects of RAPA targeting at foam cells. |
| 期刊： | 2017年第28卷第1期 |
| 作者： | 胡华钟，王仲萍，陈亦清，朱秋连，林彩燕，严鹏科 |
| AUTHORS： | HU Huazhong，WANG Zhongping，CHEN Yiqing，ZHU Qiulian，LIN Caiyan，YAN Pengke |
| 关键字： | 高效液相色谱法；雷帕霉素；含量测定；靶向药物；泡沫细胞 |
| KEYWORDS： | HPLC； Rapamycin； Content determination； Targeting medicine； Foam cells |
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